TGuide FFPE DNR vieno žingsnio rinkinys

A-1 Maža ląstelių ar viruso koncentracija pradiniame mėginyje-praturtinkite ląstelių ar virusų koncentraciją.

A-2 Nepakankama mėginių lizė-mėginiai nebuvo kruopščiai sumaišyti su lizės buferiu. Siūloma gerai išmaišyti, maišant 1-2 kartus impulsiniu sūkuriu. - Nepakankama ląstelių lizė, kurią sukelia proteinazės K aktyvumo sumažėjimas. Siūloma audinį supjaustyti smulkiais gabalėliais ir pratęsti vonios laiką, kad būtų pašalintos visos lizato liekanos.

A-3 Nepakankama DNR adsorbcija. -Prieš perkeliant lizatą į gręžimo kolonėlę, nebuvo pridėta etanolio arba mažai procentų vietoj 100% etanolio.

A-4 Eliuavimo buferio pH vertė yra per maža. -Nustatykite pH tarp 8,0–8,3.

Likutis etanolyje eliuente.

- Eliuente yra skalbimo buferio likučio PW. Etanolį galima pašalinti centrifuguojant sukamąją kolonėlę 3–5 min., Po to 1-2 minutes patalpinant kambario temperatūroje arba 50 ℃ inkubatoriuje.

A-1 Mėginys nėra šviežias. - Išskirkite teigiamą mėginio DNR kaip kontrolę, kad nustatytumėte, ar DNR mėginyje suskaidyta.

A-2 Netinkamas išankstinis apdorojimas. - Priežastis yra per didelis šlifavimas skystu azotu, drėgmės susigrąžinimas arba per didelis mėginio kiekis.

Išankstinis apdorojimas skirtingiems mėginiams turėtų skirtis. Augalų mėginius būtinai kruopščiai sumalkite skystu azotu. Gyvūnų mėginiai homogenizuojami arba kruopščiai sumalami skystu azotu. Mėginiams, kurių ląstelių sienelės yra sunkiai sulaužomos, pvz., G+ bakterijoms ir mielėms, siūloma ląstelės sienoms sulaužyti naudoti lizocimą, lizikazę arba mechaninius metodus.

4992201/4992202 Augalų genomo DNR rinkinys naudoja kolonomis pagrįstą metodą, kurio ekstrahavimui reikalingas chloroformas. Jis ypač tinka įvairiems augalų mėginiams, taip pat augalų sausiems milteliams. „Hi-DNAsecure Plant Kit“ taip pat yra kolonėlės, tačiau nereikia ekstrahuoti fenolio/chloroformo, todėl jis yra saugus ir netoksiškas. Tinka augalams, kuriuose yra daug polisacharidų ir polifenolių. 4992709/4992710 „DNAquick Plant System“ taiko skysčio pagrindu pagamintą metodą. Fenolio/chloroformo ekstrahavimas taip pat nereikalingas. Valymo procedūra yra paprasta ir greita, neribojant pradinių mėginių kiekio, todėl vartotojai gali lanksčiai koreguoti kiekį pagal eksperimentinius reikalavimus. Didelio dydžio gDNR fragmentus galima gauti esant dideliam derliui.

Genominė DNR buvo išgauta iš skirtingų žmogaus viso kraujo mėginių TIANamp kraujo DNR rinkiniu. Rezultatai yra tokie. Rezultatai pateikiami tik kaip nuoroda, faktiniai ekstrahavimo rezultatai priklauso nuo mėginių sąlygų.

Kraujo krešulio DNR ekstrahavimas gali būti atliekamas naudojant šiuose dviejuose rinkiniuose esančius reagentus, tiesiog pakeičiant protokolą į konkrečią kraujo krešulio DNR ištraukimo instrukciją. Paprašius galima išduoti minkštą kraujo krešulio DNR ištraukimo protokolo kopiją.

Šviežią mėginį suspenduokite 1 ml PBS, įprasto fiziologinio tirpalo arba TE buferinio tirpalo. Mėginį visiškai homogenizuokite homogenizatoriumi, o nuosėdos centrifuguojant surenkamos į mėgintuvėlio dugną. Supernatantą išmeskite ir nuosėdas pakartotinai suspenduokite 200 μl buferinio tirpalo GA. Toliau pateiktą DNR valymą galima atlikti pagal instrukciją.

Norint išvalyti gDNR plazmoje, serume ir kūno skysčių mėginiuose, rekomenduojama naudoti „TIANamp Micro DNA Kit“. Norint išvalyti viruso gDNR iš serumo/plazmos mėginių, rekomenduojama naudoti TIANamp viruso DNR/RNR rinkinį. Norint išvalyti bakterijų gDNR iš serumo ir plazmos mėginių, rekomenduojamas TIANamp bakterijų DNR rinkinys (teigiamų bakterijų atveju reikia įtraukti lizocimą). Seilių mėginiams rekomenduojama naudoti „Hi-Swab“ DNR rinkinį ir „TIANamp“ bakterijų DNR rinkinį.

Grybų genomui išgauti rekomenduojama naudoti „DNAsecure Plant Kit“ arba „DNAquick Plant System“. Mielių genomui išgauti rekomenduojamas „TIANamp“ mielių DNR rinkinys (lizikazė turi būti paruošta savarankiškai).